布氏桿菌病是一種由布魯氏菌引起的人獸共患動(dòng)物源性細菌性傳染病，它是世界動(dòng)物衛生組織（OIE）規定的B類(lèi)動(dòng)物疫病，我國也將其列為二類(lèi)動(dòng)物疫病之首。該病不僅阻礙我國畜牧業(yè)的發(fā)展，同時(shí)對人體健康產(chǎn)生重大影響，21世紀由于畜間布病的影響，我國人間布病的發(fā)病率有所提高，國家適時(shí)出臺了《畜間布魯氏菌病防控五年行動(dòng)方案（2022—2026年）》，確定了到2026年，我國牧場(chǎng)個(gè)體陽(yáng)性率控制在0.4%以下，群體陽(yáng)性率控制在7%以下的總體目標。為達成目標離不開(kāi)檢測技術(shù)的支持，現階段布病的檢測方法較多：如虎紅平板凝集試驗（RBPT）、試管凝集試驗（SAT）、補體結合試驗（CFT）、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）等。但虎紅平板凝集試驗（RBPT）還是應用最廣泛的檢測手段。

一、布氏桿菌病虎紅平板凝集試驗

（RBPT）的優(yōu)勢及原理

1、當前布氏桿菌病虎紅平板凝集試驗（以下簡(jiǎn)稱(chēng)虎紅平板凝集試驗）仍然是我國布病診斷使用頻率最高、最主要的檢測方法，是我國法定的檢測方法，在國際貿易中也是牛、羊、豬布魯氏菌病檢測的指定試驗，該檢測方法具有試驗試劑成本低廉、操作簡(jiǎn)便、快速、檢出率高等優(yōu)勢，被廣泛應用于布病的大規模篩查、引種、及疫苗免疫效果評價(jià)等。由于本方法不需要特殊的試驗設備，更適于基層實(shí)驗室和現場(chǎng)試驗，經(jīng)簡(jiǎn)單培訓后，養殖戶(hù)也可自行完成檢測。為布病的防控及凈化提供了強有力的檢測手段。

2、虎紅平板凝集試驗又稱(chēng)為班氏孟加拉紅平板凝集試驗。由于所用的抗原是酸性(PH3.6-3.7)帶色的抗原，該抗原與被檢血清作用時(shí)能抑制血清中的lgM類(lèi)抗體的凝集活性、檢查的抗體是lgG類(lèi)，因此提高了反應的特異性。

二、試驗材料準備

1、由哈藥集團生物疫苗有限公司生產(chǎn)的虎紅平板凝集抗原、標準陽(yáng)性血清、陰性血清。陰性和陽(yáng)性血清為凍干品，使用時(shí)按標明的毫升數用0.5%苯酚（俗稱(chēng)石炭酸）生理鹽水進(jìn)行稀釋備用。

2、采血應規范、自然出清、且勿添加抗凝血劑，被檢血清應新鮮，無(wú)明顯蛋白凝塊，無(wú)溶血和無(wú)腐敗氣味。

3、潔凈玻璃板，其上劃分成4c㎡小格并做好與家畜相應的標號或者使用凝集試驗板。

4、吸管或移液器，適于滴加30μL（0.03mL）液體。移液器的規格最好為5-50μL，確保劑量的準確。

5、準備牙簽供攪拌用，確保每個(gè)樣本都使用單獨牙簽。

6、稱(chēng)取0.5克苯酚（俗稱(chēng)石炭酸），加入100ml的生理鹽水中，配置后高壓鍋中121℃高壓30分鐘。

三、操作方法

1、實(shí)驗前，應將抗原在室溫放置30-60min。

2、將玻璃板上各方格標記被檢血清號，然后加相應被檢血清30μL（0.03mL）。

3、在被檢血清旁滴加虎紅平板凝集抗原30μL（0.03mL）。

4、用牙簽類(lèi)小棒攪動(dòng)血清和抗原，使之充分混合，在4分鐘內觀(guān)察結果，確保每個(gè)樣本血清使用單獨的牙簽。

5、每次試驗應設陰性血清、陽(yáng)性血清對照。

四、結果判定

1、在陰、陽(yáng)性血清對照成立的條件下，方可對被檢血清進(jìn)行判定。

2、受檢血清在4min內出現肉眼可見(jiàn)凝集現象者判為陽(yáng)性(+)，無(wú)凝集現象，呈均勻粉紅色者判為陰性(-)。一定注意超過(guò)4min沒(méi)有判定意義。

3、在觀(guān)察時(shí)可將玻璃板或凝集板進(jìn)行搖動(dòng)使混合液流動(dòng)，更利于結果的觀(guān)察。

4、如下圖1號為陰性，2號為陽(yáng)性。如家畜未接種布病疫苗，則陽(yáng)性者為感染布氏桿菌病。

五、注意事項

1、血清的質(zhì)量是影響布病血清學(xué)試驗結果準確性的重要因素之一，血清最好是新鮮、清亮透明、無(wú)溶血、防止細菌污染，并且避免反復凍融。為使檢測結果準確最好使血液自然出清，自然出清優(yōu)于使用離心機�？蓽p少纖維蛋白原與虎紅抗原產(chǎn)生非特異性凝集反應。

2、抗原在室溫放置30min-60min進(jìn)行回溫，利于抗原與抗體的結合。

3、在早晨喂料前或停食后6小時(shí)進(jìn)行采血，空腹血清出現假陽(yáng)性少。采集血液樣本時(shí)不要加抗凝劑，以免影響對檢測結果做出正確的判定。

4、本試驗溫度在室溫22±4℃進(jìn)行結果更加準確，一定溫度范圍內，溫度越高，血清學(xué)反應進(jìn)行的越快。因此，在試驗前要注意環(huán)境溫度是否適合進(jìn)行本試驗。

5、凡是試驗中凝集顆粒不規則，大小不勻，片狀或絮狀，凝集不清澈者，一般為假陽(yáng)性，否則凝集顆粒規則大小均勻，凝集清澈者為陽(yáng)性。

6、抗原的質(zhì)量是影響布病血清學(xué)試驗結果準確性的關(guān)鍵性因素之一，一定要采購正規廠(chǎng)家、產(chǎn)品穩定、經(jīng)國家認可的產(chǎn)品。運輸過(guò)程中要2-8℃冷鏈運輸，以確保產(chǎn)品質(zhì)量。

7、對于未操作過(guò)該試驗的人員，每次進(jìn)行檢測的樣本數量不宜超過(guò)5個(gè)，并且抗原最好統一加到血清旁，最后分別用牙簽進(jìn)行混勻。